2016年山东省聊城市临床病例中2种罕见施万菌的鉴定

梁胜楠; 姜祥坤; 杜银菊; 周璞; 刘莉; 程利红; 王多春

doi:10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.010

引用本文: 梁胜楠, 姜祥坤, 杜银菊, 周璞, 刘莉, 程利红, 王多春. 2016年山东省聊城市临床病例中2种罕见施万菌的鉴定[J]. 疾病监测. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.010 shu

Citation: Shengnan Liang, Xiangkun Jiang, Yinju Du, Pu Zhou, Li Liu, Lihong Cheng and Duochun Wang. Isolation of two rare Shewanella spp. from specimens of patients in Liaocheng[J]. Disease Surveillance. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.010 shu

2016年山东省聊城市临床病例中2种罕见施万菌的鉴定

梁胜楠 ^{1

,} ,
姜祥坤 ¹ ,
杜银菊 ¹ ,
周璞 ¹ ,
刘莉 ¹ ,
程利红 ¹ ,
王多春 ^{2

,

,}

1.
聊城市疾病预防控制中心，山东聊城 252000
2.
中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，传染病预防控制国家重点实验室，北京 102206

作者简介: 梁胜楠，女，山东省聊城市人，硕士，主管技师，从事病原微生物检验和研究工作，Email：lccdclsn@126.com;

通信作者: 王多春, wangduochun@icdc.cn

基金项目: 山东医药卫生科技发展计划(No.2016WS0201)

摘要: 目的对2016年山东省聊城市临床患者分离株进行鉴定以及分析其生化特性和药物敏感性。方法对患者来源标本及6株菌株进行选择性培养基分离培养，并进行生化试验、溶血试验、耐盐耐热实验和药敏试验，使用API生化鉴定系统、VITEK 2 Compact、全自动快速微生物质谱检测系统进行鉴定，并进行16S rRNA和gyrB序列分析。结果8株菌在菌落形态和生化特性上差异无统计学意义，只有溶血状态有所不同，临床鉴定系统有局限性，只能分辨到海藻施万菌和腐败施万菌，进一步使用16S rRNA和gyrB序列检测方法，确认患者分离株属于2种罕见的施万菌，即鲍施万菌和优佩内施万菌。结论首次在中国大陆的临床病例中，鉴定了2株由罕见施万菌导致的感染病例。由施万菌属引起的临床感染还需要进一步重视，并加强监测。

关键词:

English

Isolation of two rare Shewanella spp. from specimens of patients in Liaocheng in 2016

1.
Liaocheng Prefectural Center for Disease Control and Prevention, Liaocheng 252000, Shandong, China
2.
National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China

Corresponding author: Duochun Wang, wangduochun@icdc.cn

Received Date: 2019-05-28
Available Online: 2019-09-01
Fund Project: This study was supported by the Medical Health Science and Technology Development Project of Shandong Province (No.2016WS0201)

Abstract: ObjectiveTo identify the isolates of Shewanella spp. from two patient specimens in Liaocheng and explore the biochemical characteristics and drug susceptibility of the Shewanella spp.MethodsTwo specimens from the two patients and other 6 Shewanella spp. strains revived were cultured by using selective medium, and biochemical test, hemolytic test, salt-resistant and heat-resistant tests, drug-resistance test were conducted for the strains. API and VITEK 2 Compact, VITEK MS systems were used for the identification of the strains, 16S rRNA and gyrB sequence analyses were conducted.ResultsThe morphology and biochemical characteristics of 8 strains were consistent, the hemolytic state was different. The clinical identification system could only identified Shewanella algae and Shewanella putrefaciens. Two strains isolated from the patients were further identified as rare Shewanella haliotis and Shewanella upenei through 16S rRNA and gyrB gene sequence analyses.ConclusionIt was the first time to isolate rare Shewanella spp. from clinical cases in China. Further attention needs to be paid to clinical infection caused by Shewanella and the surveillance should be strengthened.

Key words:

1. [1]
  Pagani L, Lang A, Vedovelli C, et al. Soft tissue infection and bacteremia caused by Shewanella putrefaciens[J]. J Clin Microbiol, 2003,41(5):2240–2241. DOI:10.1128/JCM.41.5.2240−2241.2003.
2. [2]
  Chen YS, Liu YC, Yen MY, et al. Skin and soft-tissue manifestations of Shewanella putrefaciens infection[J]. Clin Infect Dis, 1997,25(2):225–229. DOI:10.1086/514537.
3. [3]
  Poovorawan K, Chatsuwan T, Lakananurak N, et al. Shewanella haliotis associated with severe soft tissue infection, Thailand, 2012[J]. Emerg Infect Dis, 2013,19(6):1019–1021. DOI:10.3201/eid1906.121607.
4. [4]
  Zong ZY. Nosocomial peripancreatic infection associated with Shewanella xiamenensis[J]. J Med Microbiol, 2011,60(9):1387–1390. DOI:10.1099/jmm.0.031625-0.
5. [5]
  汪永禄, 王多春, 詹圣伟, 等. 从食物中毒患者标本中分离鉴定海藻和腐败施万菌[J]. 中华流行病学杂志,2009,30(8):836–840. DOI:10.3760/cma.j.issn.0254−6450.2009.08.018.
  Wang YL, Wang DC, Zhan SW, et al. Isolation and characterization of Shewanella spp. from patients of food poisoning[J]. Chin J Epidemiol, 2009,30(8):836–840. DOI:10.3760/cma.j.issn.0254−6450.2009.08.018.
6. [6]
  Wang DC, Wang YL, Huang HN, et al. Identification of tetrodotoxin-producing Shewanella spp. from feces of food poisoning patients and food samples[J]. Gut Pathog, 2013,5:15. DOI:10.1186/1757−4749−5−15.
7. [7]
  Holt HM, Søgaard P, Gahrn-Hansen B. Ear infections with Shewanella alga: a bacteriologic, clinical and epidemiologic study of 67 cases[J]. Clin Microbiol Infect, 1997,3:329–334. DOI:10.1111/j.1469−0691.1997.tb00622.x.
8. [8]
  Dhawan B, Chaudhry R, Mishra BM, et al. Isolation of Shewanella putrefaciens from a rheumatic heart disease patient with infective endocarditis[J]. J Clin Microbiol, 1998,36(8):2394.
9. [9]
  Lane DJ. 16S/23S rRNA sequencing［M］//Stackebrandt E, Goodfellow M. Nucleic acid techniques in bacterial systematics. New York: Wiley, 1991: 115-175.
10. [10]
  Fang YJ, Wang YL, Liu ZD, et al. Multilocus sequence analysis, a rapid and accurate tool for taxonomic classification, evolutionary relationship determination, and population biology studies of the genus Shewanella[J]. Appl Environ Microbiol, 2019,85(11):e03126–18. DOI:10.1128/AEM.03126−18.
11. [11]
  Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI). Performance standards forantimicrobial susceptibility testing: Twenty-fourth informational supple-ment, 2014, M100-S24［S］. Wayne, PA, USA: CLSI, 2014.
12. [12]
  Janda JM, Abbott SL. The genus Shewanella: from the briny depths below to human pathogen[J]. Crit Rev Microbiol, 2014,40(4):293–312. DOI:10.3109/1040841X.2012.726209.
13. [13]
  Holt HM, Gahrn-Hansen B, Bruun B. Shewanella algae and Shewanella putrefaciens: clinical and microbiological characteristics[J]. Clin Microbiol Infect, 2005,11(5):347–352. DOI:10.1111/j.1469−0691.2005.01108.x.
1. [1]
  孙肖红 , 谭毅 , 王环宇 , 莫兆军 , 谢艺红 , 冯云 , 闭福银 , 周开娇 , 孟维珊 , 潘晓玲 , 付士红 , 梁国栋 . 2005年广西媒介蚊虫中流行性乙型脑炎病毒的分离鉴定. 疾病监测, 2010, 25(2): 120-123. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2010.02.011
2. [2]
  罗惠蓉 , 雷凌冰 , 伍颂民 , 廖育煌 , 潘志明 , 王鲁平 , 梁国栋 . 广州市1985～1990年4株登革热病毒分离和鉴定. 疾病监测, 1993, 8(2): 36-39. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.1993.2.36
3. [3]
  蔡红艳 , 方玉洁 , 于可艺 , 黄振洲 , 代航 , 王多春 . 基于16S rRNA和gyrB基因的施万菌种水平鉴定分析. 疾病监测, 2020, 35(12): 1-6.
4. [4]
  胡源 , 何丽华 , 张建中 . 鲍曼不动杆菌临床分离株分子生物学鉴定分析. 疾病监测, 2010, 25(3): 202-204. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2010.03.012
5. [5]
  司晨琛 , 李振军 , 唐璐 , 韦超 , 吉兴照 , 徐帅 , 楼永良 . secA1基因用于诺卡菌菌种鉴定分型的研究. 疾病监测, 2016, 31(12): 1001-1006. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.12.007
6. [6]
  李欣悦 , 李凤娟 , 杜鹏程 , 王瑞白 , 王多春 . rpoD和gyrA基因对气单胞菌鉴定的比较分析. 疾病监测, 2016, 31(3): 200-204. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.03.006
7. [7]
  高雯洁 , 王蔚 , 李萍 , 王恒辉 , 郭金磊 , 高蕾 , 陈黎霞 . 一例印地安纳沙门菌致小儿败血症的鉴定溯源分析. 疾病监测, 2019, 34(12): 1122-1125. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.12.019
8. [8]
  李路茜 , 李振军 , 楼永良 . GyrB基因在诺卡菌菌种鉴定中的应用研究. 疾病监测, 2016, 31(6): 503-506. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.014
9. [9]
  王斌 , 王红 , 熊衍文 , 许彦梅 , 刘祥 , 肖波 , 孙松松 , 周阳 , 白锐 , 张玲 . 16S rDNA序列在艾伯特埃希菌鉴定中的应用. 疾病监测, 2016, 31(3): 205-208. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.03.007
10. [10]
  黄有平 , 金旭华 , 叶菊连 , 罗芸 , 李珺 , 宋小军 , 黄忱 , 金大智 . 杭州市富阳区住院腹泻患者艰难梭菌感染及菌株分子特征分析. 疾病监测, 2019, 34(3): 232-236. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.03.011
11. [11]
  焦俊 , 张焕萍 , 王淑峰 , 李浩 . 下呼吸道感染病原菌分布及耐药性监测. 疾病监测, 2009, 24(10): 792-795. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.10.022
12. [12]
  . 旺兹沃思沙门菌耐药分子流行病学特征研究. 疾病监测, 2015, 30(1): 50-57. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.01.014
13. [13]
  毕德增 , 陈振光 , 陈敏 , 王士明 , 宋秀萍 , 贺金荣 , 范明远 . 从福建首次分离出斑点热群立克次体. 疾病监测, 1996, 11(1): 10-13. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.1996.1.10
14. [14]
  刘建军 , 程小雯 , 何建凡 , 杨洪 . 深圳市1998-1999年流感病毒分离及抗体水平测定. 疾病监测, 2001, 16(5): 169-172. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2001.5.169
15. [15]
  赵季文 , 贾成梅 , 糜祖煌 , 华咏 , 徐萃瑜 , 施素洁 . 我国首次成功分离穿通支原体和发酵支原体的报告. 疾病监测, 2000, 15(11): 405-409. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2000.11.405
16. [16]
  陈振浩 , 赵娟利 , 余小定 , 俞如权 . 泌尿生殖道解脲支原体和人型支原体的分离培养与药敏检测分析. 疾病监测, 2006, 21(4): 184-187. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2006.4.184
17. [17]
  亚红祥 , 沈姝 , 苏正元 , 邓菲 , 张云智 . 云南省西北地区家畜体表蜱类形态学与分子生物学鉴定. 疾病监测, 2017, 32(7): 609-614. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2017.07.019
18. [18]
  刘国栋 , 崔步云 , 刘荣臻 , 李元凯 . 布鲁氏菌多重聚合酶链反应鉴定研究. 疾病监测, 2008, 23(5): 271-273. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2008.5.271
19. [19]
  王蕾 , 叶长芸 , 赵爱兰 , 许彦梅 , 徐建国 . 一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定. 疾病监测, 2007, 22(7): 441-443. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2007.7.441
20. [20]
  支文靖 , 武万水 , 唐泓 , 郭建锋 , 杨秀琴 , 高红梅 . 儿童肺炎衣原体感染的研究. 疾病监测, 1996, 11(3): 89-93. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.1996.3.89

图 1 16S rRNA(A)和gyrB (B)序列进化树鉴定结果

Figure 1. Phylogenic tree identification results of 16S rRNA(A)and gyrB (B) sequences

下载: 全尺寸图片幻灯片

表 1 微生物鉴定系统结果

Table 1. Result of microbiological identification system

菌株编号	API 20E			VITEK 2		VITEK MS
菌株编号	鉴定结果	ID值（%）	t值	鉴定结果	可信度（%）	鉴定结果	可信度（%）
20-23R^T	腐败施万菌	99.70	0.90	腐败施万菌	99.00	腐败施万菌	99.90
ATCC 51192^T	腐败施万菌	99.70	0.90	海藻施万菌	99.00	海藻施万菌	99.90
DW01 ^T	腐败施万菌	99.70	0.90	腐败施万菌	99.00	海藻施万菌	99.90
MAS2723	腐败施万菌	99.00	0.65	腐败施万菌	99.00	海藻施万菌	99.90
LC2016-5	腐败施万菌	99.00	0.90	腐败施万菌	99.00	腐败施万菌	99.90
2014LZ6-2	腐败施万菌	99.90	0.72	腐败施万菌	99.00	腐败施万菌	99.90
2014LZ7-8	腐败施万菌	99.90	0.72	腐败施万菌	99.00	腐败施万菌	99.90
LC2016-1	腐败施万菌	99.00	0.82	海藻施万菌	99.00	海藻施万菌	99.90

下载: 导出CSV

表 2 药敏试验结果

Table 2. Result of antibiotic susceptibility test

抗生素	菌株编号
抗生素	20-23R^T	ATCC 51192^T	DW01^T	MAS2723	LC2016-5	2014LZ6-2	2014LZ7-8	LC2016-1
氨苄西林	4(S)	16(I)	8(S)	≤2(S)	64(R)	4(S)	≤2(S)	4(S)
头孢他啶	≤1(S)	2(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)
氨苄西林/舒巴坦	4/2(S)	64/32(R)	32/16(R)	≤2/1(S)	16/8(I)	≤2/1(S)	≤2/1(S)	≤2/1(S)
亚胺培南	1(S)	1(S)	1(S)	≤0.25(S)	1(S)	0.5(S)	≤0.25(S)	0.5(S)
四环素	≤1(S)	4(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)
萘啶酸	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)	＞64(R)	≤2(S)	≤2(S)	＞64(R)
红霉素	＞16(R)	1(S)	≤0.5(S)	≤0.5(S)	≤0.5(S)	≤0.5(S)	≤0.5(S)	≤0.5(S)
头孢西丁	64(R)	64(R)	32(R)	≤2(S)	4(S)	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)
氯霉素	≤2(S)	4(S)	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)	≤2(S)	32(R)
头孢噻肟	≤0.25(S)	2(I)	≤0.25(I)	≤0.25(S)	≤0.25(S)	≤0.25(S)	≤0.25(S)	≤0.25(S)
头孢唑林	＞16(R)	＞16(R)	＞16(R)	8(R)	＞16(R)	16(R)	16(R)	2(S)
庆大霉素	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)	≤1(S)
复方磺胺	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	≤0.25/0.475(S)	＞8/152(R)
阿奇霉素	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)	＞64(S)
环丙沙星	0.125(I)	0.25(I)	0.25(I)	≤0.03(S)	4(R)	0.125(I)	≤0.03(S)	8(R)
注：表内数据为最低抑菌浓度（μg/ml）；R. 耐药；I. 中等；S. 敏感